细胞株构建

  构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

  细胞株:细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株(Cell Strain)。 细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株（Cell Strain）。细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物成为细胞株。细胞株：原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株。

稳定细胞株的构建周期长、难度大，每一步都很关键，尤其是细胞转染，常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒），根据不同的实验条件，选择的方法，来达到实验目的。

  深圳瑞普逊在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验，熟悉每一步操作，尤其对过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等方面有独到的经验，可以为科研客户构建目的细胞株提供高效率高质量的服务。

深圳瑞普逊提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统，构建含有目的基因CDS的质粒/病毒，通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因，利用抗生素筛选，得到稳定表达的高拷贝克隆，经过32代的稳定性QC检测，完成稳定细胞株的构建工作。

主要包含如下步骤:

1. 载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；

2. 转染/感染；

3. 目的蛋白初步检测；

4. 抗生素筛选；

5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；

6. 单克隆细胞株稳定性检测。

特殊的过表达蛋白/细胞，请事先咨询。